INFECÇÃO EXPERIMENTAL EM CAPRINOS COM TAQUIZOÍfOS DE TOXOPIASMA GONDIIRESUMO
Os autores descrevem os resultados obtidos após infecção experimental em caprinos com Toxoplasma gondii. Foram usados 11 animais machos, mestiços, hígidos e com sorologia negativa para toxoplasma: 4 inoculados pela via intramuscular, 4 pela via subcutânea e 3 deixados como controle. A cepa utilizada foi a RH e o número de taquizoítos variou de l x106 a 1,5x106 • Em todos os animais inoculados foi observada hipertermia e três mostraram inapetência e diarréia que perdurou por 3 a 4 dias. Os títulos de anticorpos antitoxoplasma, obtidos pela reação de hemaglutinação indireta 30 dias após a infecção, variaram de 1:256 (3 animais) a 1:1024 (5 animais). A parasitemia foi demonstrada em todos os caprinos inoculados, nunca nos controles, iniciou no 62 dia após a infecção e perdurou até o 102• Após a infecção, os exames p.ematológicos (eritrograma e leucograma) e proteína total do soro, demonstraram algumas alterações. As tentativas de reisolamento do protozoário a partir das vísceras dos caprinos inoculados não obtiveram êxito.
PALAVRAS-CHAVE:
Toxoplasma gondii, caprinos; infecção experimental.
ABSTRACT
The authors describe the results obtained after experimental infection of goats with Toxoplasma gondii by intramuscular and subcutaneous routes. Eleven animais were utilized: 4 inoculated with l x106 tachyzoites, 4 with 1.5x106 and 3 remained as the control. In the inoculated animais an increase in the temperature was observed. Diarrhoea and inappetence were observed in 3 animais for three or four days. Titres for antibodies to T.gondii, detected by indirect hemmaglutination, were 1:256 (3 animais) and 1:1024 (5 animais), 30 days after inoculation (DAI). Parasitemia was detected between the 6th and 10th DAI. Alterations were detected in hematological tests. The parasitism in their tissues was not demonstrated by bioprobe.
KEY WORDS:
Toxoplasma gondii; goats; experimental infection.
INTRODUÇÃO
Desde a sua descoberta, em 1908, o Toxoplasma gondii tem sido descrito em várias espécies animais, diretamente por meio de isolamentos parasitológicosou indiretamente por provas sorológicas (HAGIWARA, 1977; JACOBS et al., 1960; WICKHAM & CARNE, 1950). Estas pesquisas revelaram que determinadas espécies hospedeiras são mais resistentes geneticamente do que outras, e que a patogenicidade das cepas isoladas também é variável(DUBEY & FRENKEL,1973; ITO et al.,1975).
Na espécie caprina um dos primeiros relatos sobre toxoplasmose foi o de FELDMAN & MILLER (1956), nos Estados Unidos, no qual os autores constataram, por meio da reação de Sabin & Feldman, a prevalência de anticorpos antitoxoplasma em dois - grupos de caprinos da área central de Nova York;
Posteriormente alguns casos de toxoplasmose em caprinos ocasionando perdas econômicas devido a abortos, natimortos ou crias debilitadas também foram descritos sendo um dos primeiros o de MUNDAY & MASON (1979), que apontaram a primeira ocorrência natural de T.gondii como causa de aborto em caprinos na Tasmânia, Austrália.
No Brasil, AMARAL et al. (1978) pesquisaram, por meio da reação de hemaglutinação indireta, a prevalência de anticorpos antitoxoplasma em soros de 100 caprinos procedentes do Estado da Bahia e encontraram 10% de animais positivos com títulos iguais ou superiores a 1:64.
SPÓSITO FILHA et aL(1983) isolaram 4 cepas de T. gondii a partir de diafragmas de caprinos oriundos da Bahia e abatidos em matadouros de São Paulo.
O presente trabalho teve o objetivo de observar aspectos clínicos, sorológicos, parasitológicos e hematológicos em caprinos experimentalmente inoculados com T. gondii.
MATERIAL E MÉTODOS
Animais
Foram utilizados 11 caprinos, machos, hígidos e com sorologia negativa para toxoplasma, quando testados pela reação de hemaglutinação indireta.
Quatro animais foram inoculados pela via intramuscular: dois receberam l x l 06 taquizoítos e os outros dois receberam 1,5x 106•
Quatro animais foram inoculados pela via subcutânea: dois receberam l xl 06 taquizoítos e os outros dois receberam 1,5x106 •
Três animais não foram inoculados e permaneceram como controles: dois foram mantidos separados dos demais e um coabitou com os inoculados.
A amostra de T. gondii utilizada foi a RH, previamente mantida em camundongos albinos indicadores por passagens sucessivas.
Acompanhamento clínico
De cada animal foram medidas a temperatura e as frequências respiratória e cardíaca.
As observações clínicas foram realizadas duas vezes ao dia, manhã e tarde, antes e após a infecção, durante 30 dias consecutivos e posteriormente uma vez a cada 15 dias até o dia em que foram sacrificados.
Sorologia
As provas sorológicas foram efetuadas antes e após as inoculações por meio do teste da hemaglutinação indireta. Para a colheita do angue, feita por punctura da veia marginal da orelha, foram utilizados cartões de Nobuto. As colheitas foram feitas antes da inoculação, dois dias após a infecção (DAI), no 15º DAI e no 30º DAI.
Parasitemia
Durante 20 DAI, os caprinos foram diariamente sangrados, por punção da veia jugular, e o sangue total foi inoculado, intraperitonealmente na quantidade de 1 mL, em um lote de 3 camundongos albinos para cada caprino do experimento. Os camundongos inoculados foram observados diariamente por um período de 20 dias, findo o qual foram sangrados - para exames sorológicos de acompanhamento - e a seguir sacrificados para nova passagem em outro lote de camundongos. Parte dos órgãos dos camundongos foram examinados ou por meio de exame a fresco ou em cortes histológicos corados pela hematoxilina e eosina.
Estudos hematológicos
Por punctura da jugular, usando agulha 40x15 montada em tubo vacutainer contendo o anticoagulante EDTA, foram colhidas amostras de sangue de cada caprino: antes da inoculação, 3 DAI e 12 DAI.
Foram realizados, nas amostras colhidas, os seguintes exames: eritrograma, leucograma e proteína total do soro.
A proteinemia foi obtida por método refratométrico. As contagens celulares (hemácias e leucócitos) por método eletrônico Coulter-Coulter, modelo D, após respectiva calibração para a espécie animal em estudo. A dosagem da hemoglobina foi efetuada pelo método espectométrico sob a forma de ciano-metahemoglobina (Drabkin) e o volume globular pelo microhematócrito. As fórmulas leucocitárias foram obtidas através de esfregaços corados pelo Leishman e contados cem elementos celulares.
Reisolamento da am de T. gondü inoculada
Após um período de 17 meses de observações os caprinos foram sacrificados e necropsiados.
A fim de se tentar o isolamento da cepa inoculada, amostras das vísceras dos 11 animais foram utilizadas para a inoculação em camundongos albinos.
As vísceras utilizadas foram: baço, cérebro, rins, coração, musculatura esquelética, diafragma, fígado, testículos, retina e medula.
Cada amostra foi trabalhada segundo método descrito por JACOBS & MELTON (1957) e posteriormente inoculada pela via intraperitoneal, na quantidade de 1 mL, em 5 camundongos. Os camundongos foram observados por um período de 30 dias e depois sacrificados. De cada camundongo foram feitos exames a fresco do cérebro a fim de se visualizar possíveis cistos teciduais do protozoário. O restante do cérebro foi utilizado para nova passagem em outro lote de camundongos. Amostras de algumas vísceras dos camundongos ( coração, cérebro, fígado, baço, pulmão e rins) foram colhidas para a realização de exames histopatológicos em cortes corados pela hematoxilina e eosina.
RESULTADOS
Acompanhamento clínico
Todos os caprinos· inoculados apresentaram hipertermia e três mostraram inapetência e diarréia que perdurou por 3 a 4 DAI. Após este período se recuperaram e se mantiveram aparentemente hígidos até 17 meses após quando foram sacrificados.
Sorologia
Os caprinos inoculados apresentaram títulos negativos para anticorpos antitoxoplasma no 2º DAI.
No 15º DAI todos apresentaram títulos iguais a 1:64.
No 30º DAI, 3 animais apresentaram títulos iguais a 1:256 e 5 apresentaram títulos de 1:1.024.
Os animais controles permaneceram negativos.
Parasitemia
A parasitemia foi detectada somente por meio de anticorpos antitoxoplasma constatados nos camundongos inoculados com sangue dos caprinos experimentalmente infectados. Ela foi observada entre o 6º e 10º DAI.
Estudos hematológicos
Eritrograma:
-ocorreu eritremia em 3 animais, após 3 DAI, que persistiu apenas em um animal após 12 DAI.
-o volume corpuscular médio (V.C.M.) elevou-se em 4 animais, após 12 DAI.
-a taxa de hemoglobina sofreu redução em 6 animais após 12 DAI.
-a concentração da hemoglobina corpuscular média (C.Hb.C.M.) baixou em todos os animais após a inoculação (3 dias) e aos 12 DAI não retomou ao normal.
Leucograma:
-foi observado, somente em um animal, aumento do número dos glóbulos brancos depois da inoculação.
-houve leucopenia, sensu tatu.
-em alguns animais ocorreu leve desvio à esquerda, com neutrofilia.
-o exame citológico da série branca revelou em alguns animais, "granulações tóxicas" e/ou "fragilidade neutrófila".
Proteinemia:
-a dosagem das proteínas totais do soro apresentou elevação em 6 animais no 3º DAI.
-a proteinemia, na segunda colheita de sangue, mostrou-se dentro da amplitude de variação normal.
Reisolamento da amostra de T. gondii inoculada
As amostras das várias vísceras dos 11 caprinos inoculadas nos camundongos não proporcionaram o reisolamento da cepa de T.gondii.
DISCUSSÃO E CONCLUSÕES
Os sinais clínicos constatados se assemelharam aos encontrados por DUBEY et al.(1980) que, em caprinos experimentalmente inoculados com oocistos de T.gondii, observaram o desenvolvimento de febre entre o 2º e 4º DAI. Os animais também apresentaram perda de apetite e 5 entre os 6 inoculados pelos autores apresentaram diarréia, porém eles também observaram dispnéia, não observada no presente experimento.
Houve uma resposta imunitária detectada no 15º DAI e que se elevou no 30º DAI. Uma comparação com outros resultados não é aconselhável pois, segundo CHIARl et al. (1985), estes níveis podem variar com a sensibilidade, especificidade e reprodutividade de cada reação e com a resposta imunogênica dos diferentes hospedeiros.
O período de parasitemia observado no experimento - entre o 6º e º10º DAI - é semelhante ao descrito por DUBEY et al. (1980) que encontraram um período entre o 4º e 8º DAI.
DUBEY et al. (1980) não constataram alterações nos resultados hematológicos, permanecendo todas as leituras nos parâmetros normais. O desvio à esquerda, sem neutrofilia, que acontece nos processos infecciosos agudos, foi observado em três animais, sendo dois febris e um afebril. Alterações degenerativas foram observadas nos leucócitos de 5 caprinos, sendo que apenas 2 mostraram febre. Poliglobulia leve, por provável hemoconcentração, foi observada em 3 caprinos sendo que somente um apresentava febre. Leucopenia (sensu-strictu) não foi observada nos animais, como também não foi observado aumento de leucócitos. Entretanto, consideramos leucopenia (sensu-latu) a presença de número de leucócitos normais em animais febris. A elevação da proteinemia total, observada em 6 caprinos, apesar da ausência de análise eletroforética, sugere seja devida a elevação da gama-globulina ou alfa-2-globulina.
Com relação à tentativa de reisolamento do protozoário a partir dos tecidos dos caprinos inoculados, os resultados diferiram dos relatados por DUBEY et al.(1980) que isolaram T.gondii de vários tecidos de caprinos sacrificados após 35, 69 e 95 DAI. DUBEY (1981) não isolou o T.gondii de um caprino que morreu após o 7º DAI, mas conseguiu o isolamento a partir de musculatura esquelética de um animal que morreu no 10º DAI, indicando encistamento durante a segunda semana. Neste mesmo experimento o autor fez vários isolamentos de animais sacrificados entre o 14º e 90º DAI e também em outros caprinos necropsiados com 335, 370, 388,422 e 441 DAI.
Os caprinos utilizados no presente estudo foram sacrificados após 17 meses da inoculação (510 DAI) e o fato de não se ter conseguido sucesso nas tentativas de reisolamento pode ser em parte correlacionado aos resultados obtidos por VITOR et al. (1993) que observaram, em caprinos experimentalmente inoculados com T.gondii, que as proporções globais de tecidos positivos em animais necropsiados em diferentes períodos da infecção foram significativamente diferentes e diminuíram com o tempo. Eles observaram que com o avançar do período de infecção experimental, e ao sacrificar o animal, menor proporção de órgãos se mostraram positivos, sugerindo diminuição da intensidade do parasitismo tissular.
Por fim, não foi observado, neste experimento, diferenças significativas entre os animais inoculados com l x106 e 1,5x106 taquizoítos e nem entre os inoculados pela via intramuscular e aqueles inoculados pela via subcutânea.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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