Transformação genética mediada por Agrobacterium e expressão estável do transgene em uva Muscat Ottonel (Vitis vinifera)

A videira (Vitis vinifera L.) é uma frutífera economicamente significativa, mas seu melhoramento genético por meio do melhoramento convencional é limitado devido à alta heterozigosidade e aos longos períodos de geração. A engenharia genética oferece uma alternativa promissora para aprimorar as características da videira sem alterar as principais características varietais. Este estudo relata a transformação bem-sucedida de plantas de uva Muscat Ottonel mediada por Agrobacterium tumefaciens, com foco em um protocolo eficiente utilizando explantes foliares e condições de cultivo otimizadas. Plantas transgênicas de uva Muscat Ottonel foram geradas por meio de um protocolo otimizado envolvendo explantes foliares pré-cultivados em meio de regeneração com 100 µM de acetosiringona, seguido de cocultivo com a cepa LBA4404 de A. tumefaciens contendo o vetor pCAMBIA2301 com os genes gus e nptII. Os explantes transformados foram selecionados em meios com 30 mg/L de canamicina e 200 mg/L de cefotaxima. A organogênese dos brotos foi potencializada com 4 g/L de fitoágar e 1,5 g/L de gelrite, resultando em uma eficiência de transformação de 66,66%. Ensaios histoquímicos de GUS, PCR, Southern blot e Northern blot confirmaram integração e expressão gênica estáveis ​​em quatro das seis linhagens transgênicas. Vale destacar que as plantas transgênicas apresentaram expressão estável do gene gus sem desvios fenotípicos. Este estudo estabelece um protocolo confiável para a transformação da uva Muscat Ottonel mediada por Agrobacterium, demonstrando alta eficiência e expressão gênica estável. A ausência de resposta de hipersensibilidade na Muscat Ottonel durante a transformação contribuiu para a eficiência do processo. Este protocolo é valioso para futuros estudos genéticos e programas de melhoramento de videiras, visando à introdução de características benéficas, como resistência a doenças, em cultivares elite.

Palavras-chave:
β-glucuronidase; Agrobacterium tumefaciens; Muscat Ottonel; análise Southern blot; Vitis vinifera